潔凈手術部工程在設計、建造和驗收投入使后, 為確保在使用過程中始終能保持在規(guī)定的等級標準要求?；蛘呤怯捎谕度胧褂煤蟮木S護管理不當或手術室工作人員誤操作以及凈化空調(diào)系統(tǒng)長期使用運轉(zhuǎn)使空氣過濾器性能變化等各類因素, 會影響潔凈手術部性能參數(shù)。所以投入使用后的潔凈手術部空氣浮游菌的日常監(jiān)測是十分必要的重要工作。

我們使用環(huán)凱牌浮游菌采樣器（HKM-II）對手術室進行采樣，HKM--II 型浮游菌采樣器是一種高效的多孔吸入式浮游微生物采樣器。它根據(jù)等速采樣理論設計，采樣準確。采集頭口風速與潔凈室內(nèi)風速基本一致，能更準確地反映潔凈室內(nèi)的微生物濃度。采集樣本時，空氣攜帶顆粒以一定的速達撞擊在培養(yǎng)基表面，這一過程相當于安德森原理的 5 級，保證大于 1 微米的顆粒全部被收集。顆粒均勻撞擊在培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)基為細菌創(chuàng)造了保持活性的最佳環(huán)境，保證了測定結(jié)果精確可靠。采樣準備工作如下：

1、被測試手術室(潔凈室)溫、濕度須達到規(guī)定的要求; 靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。

2、對單向流測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 10 min;非單向流不少于 30 min 后開始。

3、 靜態(tài)測試時, 室內(nèi)人員不多于 2 人。采樣時測試人員應在采樣口下風側(cè)。

4、 測試人員應按無菌操作規(guī)程進行。采取一切措施防止采樣口的污染和其它人為對樣本的污染。

5、測試人員必須穿戴符合潔凈級別的潔凈服。

6、浮游菌測試前, 被測手術室(潔凈室)已經(jīng)過消毒。

以上準備好時，我們使用HKM-II采樣器采樣步驟：

1、 在有平臺的潔凈室內(nèi)編制培養(yǎng)皿 (XX 潔凈室, XX 測點), 操作前應用浸濕 75%乙醇的醫(yī)用脫脂棉花擦拭平臺。測試人員雙手用同樣方法嚴格消毒。在編制過程中再次仔細檢查培養(yǎng)基平皿的質(zhì)量, 有變質(zhì)、破損或污染不能使用。

2、用浸濕 75%乙醇的醫(yī)用脫脂棉花擦拭采樣器的采樣口, 采樣管、采樣器的項蓋, 轉(zhuǎn)盤及罩子內(nèi)外表面。

3、 采樣器經(jīng)消毒后不放入培養(yǎng)皿, 啟動儀器空轉(zhuǎn)運行不少于 5 min, 使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。

4、 根據(jù)手術室的潔凈度級別設定采樣量，采樣器的流量(L/min)X 采樣時間(min)=采樣量(L), 每次最小的采樣量見表 。

5 、放入培養(yǎng)皿,蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。采樣操作時, 培養(yǎng)皿應輕拿輕放, 用“五指抓拿”培養(yǎng)皿外徑, 盡量避免人為對樣本造成污染。

7、采樣點的布置及采樣點數(shù)量

注意事項：測點的位置離地面 0.8 m~1.5 m 左右(略高于手術臺面)；送風口測點位置離開送風口面 0.3 m 左右 

最少采樣點數(shù)目見下表

8、正式啟動HKM-II采樣器

1）按“采樣鍵”進入采樣快速參數(shù)選擇狀態(tài)，此時會顯示最近一次用戶設定或最后

一次使用時的相關參數(shù)（，參數(shù)組別代碼） 。

2）按“選擇鍵”選擇光標調(diào)節(jié)位置，并按“上、下鍵”調(diào)整組編號，更改組編號的同時屏幕亦將同時顯示該組編號下的各項參數(shù)設置（采樣量，采樣延遲時間，采樣地點代碼） 。

3）選擇適合的組編號后，再按“采樣鍵” ，浮游微生物采樣器即進入采樣工作狀態(tài)；此時采樣延遲倒計時將會啟動，采樣延遲倒計時結(jié)束后采樣泵自動開始運行，在到達設定的采樣量后，采樣泵將自動停止，屏幕返回主界面，本次采樣結(jié)束，相關采樣數(shù)據(jù)自動貯存。

8、 培養(yǎng)

8.1、把采樣好的培養(yǎng)皿收集倒置在已消毒過的平臺上。

8.2、用已高壓滅菌過的牛皮紙、包布包裝好裝入消毒盒送培養(yǎng)。

8.3、 雙手再經(jīng)消毒后, 小心取出已采樣過的培養(yǎng)皿樣本, 倒置于 35℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 h。

9 、菌落計算

9.1、用肉眼直接讀數(shù), 然后用 5~10 倍放大鏡檢查是否有遣漏。若平皿上有 2 個或 2 個以上菌落重疊、分辨時仍以 2 個或 2 個以上讀數(shù)。或用環(huán)凱牌全自動菌落計數(shù)儀smartcounter計數(shù)，方便直接得出結(jié)果。

9.2、填寫生物微粒檢測記錄、記錄表見。

10、 結(jié)果計算：每個測點的浮游菌濃度計算

平均濃度(個/m)=菌落數(shù)/采樣量

11、結(jié)果評定

用浮游菌平均濃度判斷潔凈室(區(qū))空氣中的微生物。(見以下潔凈手術室的等級標準)

注意： 

1）每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選的評定標準中關于細菌濃度的界限。

2）若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準, 則必須對此區(qū)域先行消毒, 然后重新采樣兩次。再次測試結(jié)果必須合格。